一、从患者来源细胞入手：纤维化程度与circRNA表达相关

环状RNA作为一类新兴调控分子，在肾纤维化中的作用受到关注。然而，hsa_circ_0008925是否通过影响组蛋白翻译后修饰参与肾纤维化，其具体机制尚不明确。

为此，研究者从20例CKD患者的尿液中分离肾小管上皮细胞，根据纤维化程度将患者分为无至轻度纤维化组和中至重度纤维化组，比较hsa_circ_0008925的表达情况。

结果显示，与无至轻度纤维化组相比，中至重度纤维化组患者尿液来源肾小管上皮细胞中的hsa_circ_0008925表达显著升高（P＜0.005）。

随后，研究者采用转化生长因子β1（TGF-β1，15 ng/ml）处理人肾近端小管上皮细胞HK-2细胞48小时，建立体外纤维化模型，并通过小干扰RNA（siRNA）沉默hsa_circ_0008925。结果发现，沉默该circRNA可减轻TGF-β1诱导的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原表达上调，提示其参与肾小管上皮细胞的纤维化相关反应。

二、解析作用机制：连接circRNA、组蛋白修饰与ARRDC3

1. hsa_circ_0008925与组蛋白H1.4结合

研究者采用RNA下拉实验，鉴定与hsa_circ_0008925相互作用的蛋白，发现其可与组蛋白H1.4结合。

在TGF-β1刺激下，HK-2细胞中的G9a表达及组蛋白H1.4第25位赖氨酸三甲基化（H1.4K25me3）水平均升高。敲低hsa_circ_0008925或使用G9a抑制剂UNC0642，均可降低上述变化。

这些结果将hsa_circ_0008925与G9a依赖的H1.4K25me3修饰联系起来，为进一步追踪其下游调控靶点提供了依据。

2. ARRDC3是下游关键靶点

为明确H1.4K25me3参与调控的基因，研究者采用染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）及染色质免疫沉淀定量PCR（ChIP-qPCR），分析其结合位点，发现ARRDC3启动子是H1.4K25me3的直接靶位点。

细胞实验显示，通过TGF-β1刺激可上调ARRDC3表达。研究者进一步通过siRNA沉默ARRDC3，并利用CRISPR-Cas9技术构建ARRDC3启动子敲除的HK-2细胞系HK-2-1G2。两种干预均可阻断TGF-β1诱导的纤维化相关反应。

综合上述实验，研究提出：hsa_circ_0008925通过G9a依赖的H1.4K25me3修饰，上调ARRDC3表达，从而促进肾纤维化。

三、动物实验验证：抑制相关通路可减轻肾纤维化

在单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠模型中，研究者进一步验证上述机制，并评估相应干预的效果。

其中，mmu_circ_0002215为hsa_circ_0008925的小鼠同源circRNA。研究者采用靶向mmu_circ_0002215或ARRDC3的腺相关病毒（AAV）等方式进行干预，并通过蛋白质印迹、组织学及免疫荧光等方法评估肾纤维化。

结果显示，抑制mmu_circ_0002215、G9a或ARRDC3，均可显著减少UUO小鼠肾脏胶原沉积，减轻肾小管损伤，并降低α-SMA表达。动物实验结果进一步支持了该调控通路在肾纤维化中的作用。

四、探索靶向递送：工程化外泌体搭载circRNA-ASO

在机制研究基础上，研究者构建了负载mmu_circ_0002215-ASO的工程化外泌体，并在其表面修饰靶向肾损伤分子1（Kim-1）的LTH肽，探索向受损肾脏递送ASO的策略。

在UUO小鼠中，该工程化外泌体可通过Kim-1靶向作用，将mmu_circ_0002215-ASO特异性递送至受损肾脏，对mmu_circ_0002215的抑制作用持续超过7天，并显著减轻肾纤维化。

这一结果展示了靶向递送circRNA-ASO在动物模型中的干预效果，为围绕该circRNA开展抗纤维化治疗研究提供了实验依据。

该研究从CKD患者尿液来源肾小管上皮细胞中的表达差异出发，通过细胞与动物实验，揭示了hsa_circ_0008925经G9a依赖的H1.4K25me3修饰、上调ARRDC3表达并促进肾纤维化的机制。同时，靶向Kim-1的工程化外泌体递送circRNA-ASO，在UUO小鼠中显示出减轻肾纤维化的效果。目前，相关干预证据来自细胞及动物实验，其在CKD患者中的应用仍有待进一步研究。

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（来源：《肾医线》编辑部）